Essais de contraste de phase avec le condenseur de Heine

[Florent]

Bonsoir à tous,

Je viens tout juste de terminer un essai de contraste de phase avec le condenseur de Heine récemment acquis pour mon Ortholux. Un frottis de cellules de l'épithélium buccal coloré à la va-vite à l'éosine... et des résultats assez bluffants, une fois les réglages du condenseurs - plus ou moins - appréhendés.
L'image est réalisée via un Leitz 70 Pv Fl oel - 1.15.

Le D80 est monté sur l'adaptateur Leitz Mikas, le tout sur le port trino de l'Ortholux (qui, étonnamment semble plus stable que le robuste système de Universal).
Une série de 4 images est compilée avec CombineZ. C'est vraiment le jour et la nuit.

cellule bucale cp heine x70 combineZ.jpg (102.58 Kio) Vu 6763 fois

Note : par accident, j'ai monté le frottis dans de l'huile à immersion.

[Christian]

Bonjour Florent,
Le résultat est effectivement très bon !
Mais je ne suis pas persuadé que tu es là en configuration strictement contraste de phase ? (je me trompe peut-être mais l'aspect général me fait douter) *
Avec le Heine, on passe vite d'un réglage à un autre, c'est d'ailleurs son gros atout avec ses éclairages intermédiaires !

* As-tu une lunette pour contrôler les anneaux ? (on peut s'en passer mais c'est très intéressant avec ce système)

[André]

Bonjour à tous, Florent, Chris

Pour le contraste de phase il est en principe inutile de colorer la préparation...mais comme c'est le résultat qui compte, ici c'est très bon!

Le noyau laisse deviner une intervention du contraste de phase vrai, le reste de la cellule devrait être entouré d'un liserai noir et la zone alentour devrait être sombre.
Les stries de la membrane cellulaire devrait aussi apparaître surtout que tu utilises un objectif à immersion.

Je suis d'accord avec toi pour dire que le Zeiss Universal est un géant au pied d'argile ....la partie amont des objectifs est nettement moins stable qu'un Ortholux,Dialux ou Laborlux !

[Ferran]

Bonjour, Florent, Christian, André :

Tel que vous suggérez, je crois aussi que non pas c'est assez bien réglé le condensateur Heine pour obtenir un bon contraste.

Aspect d'une cellule épithéliale de la muqueuse buccale (avec d'abondantes bactéries) en frais, monte avec sérum salin. Objectif Leitz Phaco NPL 40/0.65, condensateur Zernike, anneau 2.

epitelio_bucal.jpg (249.06 Kio) Vu 6743 fois

[André]

Bonjour Ferran

Oui, tu illustres ce que je voulais dire.
Sur le bord gauche on devine les stries dont je parlais et qui ne sont pas toujours visibles ...

[Ferran]

Bonsoir:
Le bord strié, que dans cette photo on observe beaucoup de vaguement (la préparation a été faite avec peu de soin, pas plus pour illustrer l'aspect en CP) on voit beaucoup plus de clarté à l'épithélium cylindrique de l'estomac et de l'intestin, avec des méthodes de coloration spécifiques ou avec du contraste de phase. Ou au moins est où j'ai pu les observer.

[Florent]

Bonjour à tous,

Merci pour vos remarques.
Effectivement, pas de stries, je l'ai mis sur le compte d'une préparation aléatoire.
J'ai bien un oculaire de centrage, mais n'ai pas encore saisi toute les subtilités du système. Suis-je sensé obtenir une image quasi incolore (d'où l'inutilité de la coloration) ?

[Florent]

Nouvel essai, toujours avec le même objectif (70). J'ai quand même coloré au bleu de méthylène et monté le tout dans du sérum physio.

DSC_9511.JPG (136.71 Kio) Vu 6656 fois

Au passage, une petite colonie de bactéries, croisée sur une cellule et particulièrement bien visible :

DSC_9518.JPG (102.6 Kio) Vu 6657 fois

DSC_9518-1.JPG (119.2 Kio) Vu 6653 fois

[Ferran]

Bonsoir Florent :

Très bonnes images ! spécialement la première à l'aspect de relief qui est obtenu avec CP.

Je pense, cependant, que si tu fais des essais de réglage avec l'Heine, tu verras meilleur les résultats avec des préparations sans colorer ; le noyau et les bactéries doivent rester ressortis avec CP, mais si tu travailles avec des préparations colores, déjà sommeil visibles pour l'intensité de la couleur.

Quand tu aies réglé le condensateur et tu obtiennes un bon résultat avec CP simplement, alors tu peux faire ce que tu voudras, mais pour les essais préalables, je crois que tu verras meilleur comme tu travailles, avec du matériel sans teindre.

[André]

Bonjour à tous,Florent

D'accord avec Ferran pour dire que c'est très bon d'autant plus que les stries dont je parlais commencent à apparaître sur les dernières photos.