Analyse pollinique du miel

[Capitaine Haddock]

Bonjour,
tout d'abord félicitation pour votre magnifique site, je pense être très bien tombé pour vous exposer la question qui me trotte en tête...

Etudiant en médecine, et apiculteur depuis un peu plus d'un an (en Belgique), je recherche à analyser la composition du miel fait par mes abeilles; les différentes espèces polliniques que l'on y retrouve...
Je dispose d'un microscope Konus Campus, de lames, d'une vieille centrifugeuse (sans réglage possible) et d'un peu de bleu de méthylène en poudre ainsi que de ....miel

J'ai lu une technique qui me semble un peu complexe ici : http://www.apidologie.org/articles/apid ... /MHS07.pdf
mais je souhaite avoir vos avis quant à la façon de procéder. Comment feriez-vous ?
Peut-être utiliseriez vous certains colorants ou autres produits ?
(J'ai observé le miel simplement étalé, et un peu dilué dans de l'eau, mais beaucoup des cristaux de sucres empêchaient la bonne observation des pollen)

J'ai trouvé différents liens pour analyser ce que je pourrai observer, et avec beaucoup de patience, je pense pouvoir m'en sortir.
http://pedagogie.ac-montpellier.fr/disc ... ledet.html
http://www.paldat.org/
http://pollens.pagesperso-orange.fr/frames.htm

Je ne sais pas vraiment comment commencer, j'ai plus l'habitude d'observer des lames toutes faites, et bien peu d'expériences dans l'élaboration de ces dernières C'est pourquoi je vous demande votre aide


D'avance, merci beaucoup pour vos réponses !
Guillaume.

[André]

Bonjour Guillaume et bienvenue sur le Naturaliste

Le plus dur sera d'isoler les grains de pollen. Est-ce que les cristaux gênants ne fondent pas lorsque tu chauffes un peu le miel?

[Fredlab]

Hello
Je n'y connais rien... mais je pose une question : est-ce que le miel ne peut pas convenir comme medium ?

[Wouazo]

Bonjour,
La méthode utilisée est basée sur la différence de densité entre les pollens et l’eau et à plus forte raison l’alcool. Normalement on devrait employer une centrifugeuse.
On prend un récipient en verre, conique, genre verre à apéritif, dans lequel on verse environ 40 cm3 d'eau distillée ou déminéralisée à 60°. On ajoute 10 - 15 grammes de miel, on laisse décanter un minimum de 12 heures. Avec une pipette ou une seringue hypodermique en partant de la partie supérieure, on aspire le liquide pour garder environ 2 cm3 de la préparation. On ajoute environ 10 à 20 cm3 d'eau distillée ou déminéralisée chauffée à environ 60°. Avec une baguette de verre, plastique, etc. (matériel neutre) on imprime un mouvement circulaire à la préparation, pour que les dépôts de particules se mettent au centre. On Laisse décanter quelques heures. Avec la pipette, l’on retire, en partant de la surface, le 2/3 de la préparation. Le restant, on le dilue avec de l'alcool éthylique (env.1cm3.)
Avec la pipette, on prélève un échantillon que l’on dépose sur une lame et l’on recouvre d’une lamelle.
Parfois on est obligé d’ajouter des colorants (éosine, bleu de méthylène etc.) pour mettre les pollens en évidence. Leur taille varie de 2,5µm pour le Myosotis à 200µm pour la Courge.
Si l’on prend une goutte de miel diluée dans de l’eau et qu’on l’observe de suite, il va y avoir beaucoup d’impuretés. J’utilise cette méthode pour voir les pollens majoritaires, ce qui détermine l’appellation d’un miel d’une variété de plante ; exemple : Miel de bourrache.

[Christian]

Bonjour à tous,
Merci beaucoup Gérard pour ce protocole qui en intéressera plus d'un !
On peut aussi se fabriquer une centrifugeuse à bon compte avec une essoreuse à salade et du polystyrène expansé (de récup), placé à l'intérieur pour maintenir les éprouvettes (leur donner un angle).

[Capitaine Haddock]

Merci beaucoup pour vos réponses
C'est d'une beauté extraordinaire ! Et quelle sensation fantastique après avoir découvert par mégarde, que lorsque l'on bouge la lame couvre-objet, les grains de pollen bougent tels des ballons de foot ! On peut vraiment apprécier leurs structures tri-dimensionelles !

Voici qq photos difficilement obtenues :


-> Peut-être frêne ou hêtre ?



je dispose à présent d'éosine et de bleu de méthylène... Quand utilisez-vous l'un plus que l'autre ? Déposer une goutte bien colorée sur la préparation précédemment obtenue est la bonne méthode d'application ?
Je me demandais aussi quand utiliser de la gélatine colorée... Est-ce pour conserver les préparations ? pour les coller irréversiblement, du vernis à ongle convient-il ?

Un tout grand merci !

[André]

Bonjour Guillaume

Bravo pour ce premier essai très concluant !
La détermination des pollens repose sur l'aspect des apertures , sur celui de l'ornementation de l'exine et différentes taille(diamètre, largeur des pores, des colpis......).
Les colorants servent uniquement à mettre ces éléments en évidence.
J'ai fait des essais à l'éosine et au bleu de méthylène, mais les ai rapidement abandonné au profit de la fuchsine de Ziehl , du vert d'iode ou du vert de méthyl.
La gélatine glycérinée permet une bonne conservation des échantillons .Le vernis à ongle est utilisé pour luter la préparation.
Le premier grain présenté montre clairement 3 apertures de type tricolpé. L'exine semble réticulée . : il faudrait une vue de surface pour pouvoir l'apprécier.
J'éliminerais le hêtre qui est tricolporé. Le frêne est un meilleur candidat.

[Capitaine Haddock]

Merci !
Je fais à présent la différence entre tricolpé et tricolporé

Voici une vue globale des différents pollens que j'ai pu observer :


Le deuxième semble quadricolpé ??


Le premier ci-dessus 'en haut à gauche est tricolpé...et allongé tel un grain de riz. Marronier ?
Le deuxième possède 3 pores et ressemble à du châtaigner ?
Le troisième ci-dessus est doté d'un drôle d'appendice ...artefact ? ou commencerait-il à germer ?!?!
Le quatrième possède une exine épineuse, et est rond avec 4 ports (quadricolporé ?) ....

J'esayerai de me procurer ces colorants... Les trouvez-vous facilement ?

merci !

[André]

Bonjour Guillaume
Tu trouveras tout ce qu'il faut en colorant chez Marcel : http://www.champignons-passion.be/

Il arrive parfois de voir le début de l"émission d'un tube pollinique , ce qui est certainement le cas sur le grain cité. (.voir : http://www.lenaturaliste.net/forum/view ... que#p19980 )
Celui d'en haut à droite pourrait correspondre à du pollen de pensée : http://www.lenaturaliste.net/forum/view ... 150&t=1026

[Laurent]

Bonjour à tous,

Je suis tombé la dessus par hasard : http://www.beekeeping.com/articles/fr/h ... inique.htm