Rhizobium du trèfle

[OlivierBarth]

Bonjour,
Suite à une "commande" des collègues de SVT de mon lycée, voici les résultats de cette délicate observation.
Il s'agit de bactéries symbiotiques de plantes, situées dans des nodosités sur les racines dans les cellules mêmes.
J'ai fait ce que j'ai pu...
D'abord les cellules pleines de bactéries :

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rhizobium_du_trefle-2.jpg (140.02 Kio) Vu 25321 fois

Ensuite, bactéries et grains d'amidon :

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Enfin, gros plan :

rhizobium_du_trefle-5.jpg (51.17 Kio) Vu 25252 fois

[Fredlab]

Hello

Travail très intéressant.
Visiblement, on a les mêmes problématiques.
Je n'ai jamais observé le contenu des nodosités et à vrai dire, le monde bactérien, avec nos pauvres microscopes, c'est de la science fiction...

Pour ma part, voici le topic que j'ai ouvert sur le forum national de SVT

(...)
J'ai prélevé un pied de Trèfle dans ma pelouse




(quelle espèce ?)

J'ai nettoyé les racines



Pris au rapport 1/1 quelques détails des racines (champ couvert - 24 mm de large)



Fait un stack avec un objectif x10 (longueur 2 à 3 mm)


(quand c'est sec, c'est tout ratatiné)

J'ai fait un premier écrasement, dans une goutte d'eau, montage entre lame et lamelle - passage à des objectifs à immersion (40x et 90x) et au contraste de phase interférentiel


(40x - projectif 5x - capteur de reflex APS)


(90x - un peu plus grand ICI)

Rhizobium correspond-t-il à ces "globules" ?

Ensuite, j'ai écrasé une nodosité, enlevé les restes de l'enveloppe.
J'ai recouvert à l'alcool isopropylique à 99% - laissé l'alcool s'évaporer (fixation)
J'ai mis pendant xx minutes du bleu de lactophénol (je pensais avoir du bleu de méthylène -> des essais à faire au lycée)
Rinçage, tamponnage...
Passage du frottis direct sans lamelle, au microscope.

Comme je n'étais pas super emballé par le rendu en lumière "normale", je suis passé au DIC
Problème...


(vues au 90x - en bien plus grand ICI)

... j'ai bien du mal à interpréter ce que je vois !
Rhizobium est-il présent ?
Je suppose que c'est "2" et que "1" correspond à un bacille quelconque.
J'ai aussi remarqué que le contenu d'une nodosité était légèrement gélatineux... d'ici à ce qu'Agrobacterium soit "collant", on pourrait se retrouver avec des particules plus ou moins minérales collées dessus, ça serait "3"

Sinon, je n'ai pas trouvé que ces bactéries étaient spécialement intracellulaires

Topic ouvert dans "question à Marc-André Selosse" - ICI (accessible à tous) - sa réponse, est très intéressante (comme toutes les autres)
Enfin, pour ces nodosités, j'ai encore pas mal de boulot... on verra ça pendant les vacances.
(si possible, je vais essayé de trouver des nodosités de Gesse, où les bactéries sont en "Y")

[OlivierBarth]

salut Fred,
l'idéal serait une coupe ultra-mince pour MET! mais ça devient du délire ...qui peut préparer ça?
J'ai essayé l'alcool, différents colorants, plusieurs nodosités, juste un minuscule morceau...il faut changer de plante et en prendre une avec de plus grosses cellules et plus grosses bactéries !
Mais non, le monde bactérien n'est pas de la science-fiction:tout est dans la préparation! !!

[Fredlab]

Hello

Pour le côté "SF", c'est tout simplement que les microscopes de lycée n'ont pas les résolutions nécessaires pour que ça en jette et là, on perd les élèves.

Pour les coupes plus fines : j'ai aussi fait ça dans des nodosités de Soja, bien plus grosses... Problème, tu crèves les cellules et leur contenu se fait la malle dans le milieu d'observation. Quand tu passes à l'immersion, c'est encore pire... tu te retrouves avec des courants de liquides chargés de bactéries vibrionnantes... partout...

Pour des plus grosses bactéries, peut-être que celles de la Gesse sont plus accessibles.

[OlivierBarth]

oui, j'ai aussi le pb de la fuite du contenu cellulaire ! N'y a t-il pas un moyen simple de le fixer avant "écrasage" (ou coupe, mieux mais plus difficile) ?

[OlivierBarth]

je persiste

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[OlivierBarth]

...et signe, avec une coloration de Gram pas très réussie ( G+ ou G- ?) je dirais G-

rhizobium_du_trefle-GRAM2.jpg (169.36 Kio) Vu 24939 fois

[Fredlab]

Hello

C'est encourageant.
On n'a pas de x100 au lycée.

De mon côté, je vais voir pour faire aussi une coloration gram
(mais pas avant les vacances).

Pour la fixation in situ, dans les cellules, à l'alcool, je ne sais pas ce que ça peut donner.

[OlivierBarth]

salut Fred,
j'ai essayé : ça ne marche pas...il faut écraser la cellule pour avoir une bonne transparence, mais du coup les bactéries sortent, même fixées à l'alcool + flamme. Peut-être ai-je mal fixé?

[lartiste]

Boujour tout le monde !
Le monde bactériologique n'est pas inaccessible même avec les microscopes de lycée !
En effet pour observer les bactéries présentes dans les nodosités, il faut en écraser une sur une lame et effectuer une coloration au bleu de méthylène. La forme sera alors observable même au microscope optique de lycée. (On pourra d'ailleurs remarque deux sortes de bactéries : bâtonnet pour l'une, Y pour l'autre). Pour connaître la composition des bactéries il faudra faire une coloration gram !
Alors à vos microscopes !