Microscope COGIT 1586

[baguette]

Cette première photo est déjà bien intéressante Bravo!
Je ne savais pas que l'on peut remplacer le bleu de méthylène par de l'encre bleue,..
En effet, il semble que les levures blanches aient exclus le colorant - elles sont donc vivantes - contrairement aux cellules bleues qui sont mortes.
Voir le fil que je viens de mettre sur le message de présentation.

Youps, non, les cellules vivantes intègrent très bien le bleu de méthylène c'est un des "colorants vitaux" avec le rouge neutre.
Quant à "l'encre bleue", tant que l'on ignore sa composition il est impossible de savoir ce qui est coloré et ce qui ne l'est pas ... en faisant très simple, encre acide ou basique ??? (la fushine basique ou la fushine acide ne colorent pas les mêmes éléments par exemple).

Faudrait pas aller trop vite, d'abord déterminer ce que l'on peut faire avec ce microscope, ensuite ce que l'on veut observer, ensuite les moyens de l'observation.
Je trouve que l'on passe un peu vite de la détermination des objectifs et de leur capacité à la notion de cytologie, ce qui est une autre paire de manche.

[Bernard-J]

Youps, non, les cellules vivantes intègrent très bien le bleu de méthylène c'est un des "colorants vitaux" avec le rouge neutre.

Youps non/oui : C'est vrai que le bleu de méthylène est un colorant vital,mais il est mal pris par les levures et ainsi - avec une concentration pas trop élevée - les levures vivantes restent blanches ou bleu clair, alors que les levures mortes se teintent très vite en bleu foncé.
Voir par exemple ce document: http://www.lavoisier.fr/pdf/fichiers/Oe ... Chap46.pdf

Tu peux faire l'essai de chauffer la prép par dessous avec un briquet pendant 10 sec et tu verras que toutes les levures deviennent bleues. Elles meurent très vite vers 50 degrés Celsius.
En ce qui concerne la coloration à l'encre bleue, je ne sais pas, mais la photo présentée ressemble bien à ce que j'attendrais d'une coloration au BM d'une culture de levure pas vraiment hyper-fraîche.

EDIT: J'avais posté cet article:
http://www.braukaiser.com/wiki/index.ph ... e_staining
"When methylene blue enters living cells, the cell's respiration (consumption of oxygen) quickly reduces it to its colorless leuco form. This is why living cells don't stain. In dead cells methylene blue can accumulate in its oxidized (blue) form."

En fait, le BM entre dans les cellules vivantes, mais est réduit rapidement en forme incolore par la respiration. Les cellules mortes ne respirent plus, ainsi la coloration devient intense.

[baguette]

Youps, non. Une coloration vitale c'est une coloration au 10.000 ou au 100.000 ème pour voir l'absorption du colorant et son absorption, pas pour colorer telle ou telle partie de la cellule en fonction de sa constitution (organites, cellulose, ou autres).
Quant à savoir ce que colore une encre dont on ne sait rien, bonne chance.
Et dire que les cellules ont exclu le colorant "parce qu'elles sont vivantes", c'est une ineptie, les colorants "vitaux" portent bien leur nom, "vitaux" et justement colorés parce qu'absorbés et assimilés.
J'aime beaucoup dans le document cité la coloration au bleu de méthylène sans donner la moindre concentration du colorant ?

[Bernard-J]

Voir en dessus- j'ai édité mon article.

[Olivier61]

Et dire que les cellules ont exclu le colorant "parce qu'elles sont vivantes", c'est une ineptie, les colorants "vitaux" portent bien leur nom, "vitaux" et justement colorés parce qu'absorbés et assimilés.

Je ne pense pas que cela soit ce dont il s'agit : le bleu de méthylène (oxydé) perd sa coloration lorsqu'il passe sous forme réduite, ce qui peut donc se réaliser à l'intérieur de levures vivantes qui respirent et pas à l'intérieur de levures mortes. Par contre, quid de la couleur du bleu de méthylène dans des cellules qui fermentent ? (il y a également réduction mais est-ce aussi rapide ?)

[baguette]

De toute façon, inutile d'ergoter sur le bleu de méthylène, il s'agit ici d'une "encre" dont nous ignorons tout, alors en tirer des conclusions.

[Bernard-J]

Et dire que les cellules ont exclu le colorant "parce qu'elles sont vivantes", c'est une ineptie, ...

Il ne s'agit pas d'une ineptie, mais d'une erreur ! Et je te remercie de l'avoir relevée. J'avais confondu avec le bleu trypan, colorant vital que j'ai aussi utilisé pour cet application et que les cellules vivantes expulsent. Il te suffira de remplacer le mot "exclu" dans ma phrase par "réduit".

De toute façon, inutile d'ergoter sur le bleu de méthylène, il s'agit ici d'une "encre" dont nous ignorons tout, alors en tirer des conclusions

Pourquoi ? Nous sommes ici pour apprendre, corriger nos erreurs (si possible) et éventuellement aussi pour expérimenter.
Moi, je serais très intéressé de voir une photo de la coloration à l'encre bleue après un chauffage de la lame comme je l'ai indiqué précédemment. La comparaison d'une culture fraîche avec une culture tuée par la chaleur est une petite expérience facile à faire, intéressante et peut aider à la prise en main du microscope et de la photographie pour un débutant - même avec une encre bleue plutôt que le BM.

Je relève aussi que dans tous les articles que j'ai trouvé sur l'observation des levures chez les brasseurs, le BM est utilisé pour distinguer les cellules mortes des cellules vivantes.

[baguette]

Bernard,

Ok, très sincèrement, toute mes excuses, il est vrai que j'ai pu paraître hautain, agressif, c'est vrai, je fonctionne un peu trop "au quart de tour" et j'avoue que la diplomatie n'est pas trop ma tasse de thé. Si tu considères que je t'ai agressé, j'en suis sincèrement désolé, et je te prie de m'en excuser.
Simplement, je ne critique pas la coloration au BM pour les levures, simplement je relève le protocole dans lequel elle est pratiquée. Dans ce protocole, je n'ai vu nulle part une concentration, or utiliser le BM à 1/1000 ou à 1/10000 ou 1/100000, ce n'est pas du tout la même chose, tout dépend du résultat que l'on veut obtenir.
Tu me parles de "chauffage", ok, rien à redire, mais reconnaît que cela change totalement le protocole ... je sais, je suis ch.... m'enfin, un protocole c'est un protocole !

PS je suis tout à fait d'accord pour apprendre et pour expérimenter, mais alors j'aimerais connaître la composition de l'encre, sans cela je ne vois pas quelle conclusion pouvoir tirer (et je ne parle même pas de l'aspect létal ou non en fonction de la concentration) ... je crois t'avoir dit que j'étais ch...., non, si !

[Hush]

Bonsoir,

Moi, je serais très intéressé de voir une photo de la coloration à l'encre bleue après un chauffage de la lame comme je l'ai indiqué précédemment. La comparaison d'une culture fraîche avec une culture tuée par la chaleur est une petite expérience facile à faire, intéressante et peut aider à la prise en main du microscope et de la photographie pour un débutant - même avec une encre bleue plutôt que le BM.

J'ai réhydraté durant 30mn une pincée de levures de boulanger dans de l'eau à 27°C . Séparé la suspension en deux quantités égales . Chauffé à 80°C l'une des suspensions pendant 20mn.
Mélangé une goutte d'encre et une goutte de chaque suspension. Observé, photographié (comme j'ai pu, la teinte jaunâtre provient j'imagine de l'éclairage à incandescence que j'utilise )
Levures vivantes traitées à l'encre bleue.

Levure4.jpg (69.24 Kio) Vu 8110 fois

Levures tuées par chauffage 80°C pendant 20mn traitées à l'encre bleue.

Levure5.jpg (82.3 Kio) Vu 8105 fois

Bonne soirée.

Joël

[Bernard-J]

Aahh, cela devient sympa ! Mais ta première photo était meilleure, parce que tu avais photographié avec un objectif plus puissant.
Laisse sédimenter les levures (5-10 min devrait suffire) et élimine une partie du surnageant. Ainsi, tu auras une suspension plus concentrée qui permettra l'utilisation de l'objectif plus puissant. Si tu peux pousser aussi le voltage de la lampe, les photos seront moins jaunes.