Le Naturaliste

Re,

J'avais lu (dans les Séguy ou les Langeron ?) que les anciens histolgistes utilisaient aussi le foie de veau / porc passé au formol … Cet opération rend le support plus dur.
Mais cela concernait l'histologie animale !
Je préfère les carottes et les patates pour mes coupes végétales …

On remarque qu'il existe un très grand nombre de supports possibles, du plus naturel au plus synthétique et bien sûr selon l'objet à couper.
On utilisera pas forcement la même chose pour une tige, une feuille, un lichen, etc ... et c'est peut-être sur ce point qu'il y aurait le plus à creuser !

ll

Bonjour Louis

Pratiquant ces coupes , je ne peux que te conseiller le PEG (que j'utilise pour les lichens à la suite des conseils de Ralf Wagner ) dont tu trouveras un exposé complet sur le site de Marcel ici:
http://users.skynet.be/Champignons_pass ... pesPEG.htm

Si tu as des questions complémentaires, n'hésite pas à les poser!

mm

Bonsoir Louis,

C'est pas épais un lichen....!

Trois solutions:

1- Prendre un thalle et le couper entre deux morceaux de "styropor "ou de moelle de sureau ( voir le sujet de Christian)et le couper avec un microtome manuel type Ranvier et un rasoir a main. Cela donne des résultats rapides et vite exploitables sur plusieurs coupes, tissus frais donc histochimie et fluorescence possibles.

2-Soit la technique du PEG , mais là je n'ai pas une expérience très favorable, j'ai toujours eu des échecs, mais je crois que c'est parce que j'utilise du PEG 4000 et qu'il faut du 1500 peut être plus mou ?

3-soit l'inclusion en paraffine ,après fixation-déshydratation -éclaircissement et inclusion- beaucoup plus longue mais qui donne des coupes très fines , mais avec quand même des rétractions tissulaires-mailleure exploitation des détails et moins de superpositions.

Vois les différents sujets sur le forum ou une discussion est en cours sur l'utilisation de la paraffine en histo végétale.

Ci joint un essai après inclusion en paraffine sur thalle de lichen et coupe au Minot.

N'hésite pas a poser toute tes questions ça fait avancer nos recherches et alimente le moulin de nos essais.

Amicalement

Katzen

Un procède (relativement) simple est l’imprégnation par la gélatine :
fixation, laver à fond a l’eau et imprégnation par la gélatine dans un étuve a 37 – 40°C :
5%: 12h
10%: 12h
20%: 12h – 24h
N’oubliez pas d’ajouter un cristal de thymol au gélatine!

Fais les blocs, laisse se solidifier a l’air et laisse sécher a l’air jusqu’a un consistance assez ferme enfin de les couper avec un microtome de Ranvier ou un microtome a glissière.
Alternatif : geler les blocs et coupe au cryotome.

Etalage des coupes dans l’eau à +/- 30°C. On peut coller les coupes sur lames en utilisent le col blanc pour le bois résistant l'eau (par exemple le Rectavit 230) dilue dans l’eau à 1-2%. Laisse sécher et dissout la gélatine dans l’eau à 37-40% avec quelques goûtes d’eau de javel.

J'utilise, pour les coupes, à la place de la moelle de sureau, des baguettes de balsa, trouvées chez un marchand de maquettes.
C'est un peu plus "dur", mais cela se coupe quand même à la lame de rasoir.
Sinon le PEG ou le PVA (chez Marcel Leconte...)

JLJ

hello

Un petit up à ce topic car je commence à me préparer à faire des coupes dans du végétal (des champi, des lichens...)
Mes coupes les plus réussies remontent à plus de 20 ans, quand j'étais étudiant.
J'utilisais une lame de rasoir, un bloc de polystyrène.
J'ai fait quelques essais ces derniers temps. Visiblement, j'ai perdu la main et en changeant de "support" (polystyrène -> styrodur), ça ne s'est pas amélioré.
Nous avons acheté un microtome à main de Ranvier (modèle "indien"). C'est un modèle sans étau pour tenir la coupe et son "support". La lame de rasoir type "coupe chou" ne semble pas non plus super affûtée...

Je vais avoir pas mal de questions car j'ambitionne de faire des séries de coupes régulières.
Si vous pouvez m'aider...
(en parallèle, je consulte d'autres fils sur le forum, je trouve des vidéos sur certains gestes, mais...)

1 - Entre une lame de rasoir, trop souple, un coupe-chou pas super affûté et d'autres solutions... que proposez-vous ? j'ai acheté une "pierre" à affûter (grain "10000") et des bandes de cuir pour affûter le coupe-chou... obtient-on facilement un fil de rasoir vraiment efficace ? dois-je me tourner vers des lames de microtome de ce genre ?

2 - En support, vous préconisez aussi la moelle de sureau (déjà essayé, je suis moyennement fan, ça use aussi le fil du rasoir), la moelle de Tournesol (je viens de me constituer un stock)... j'ai lu que certains stockaient ces moelles dans de l'alcool... ça donne un plus important ? (contrainte en plus, non ?).
Si on veut sortir de ces supports, il faut passer à la paraffine ou au PEG.
La paraffine implique une déshydratation à l'alcool (imprégnation dans des flacons à de degrés croissants - j'ai bon ?). Ce genre de traitement lèse les cellules et au final, on fait des coupes de momies, non ?
Le PEG... difficile de trouver du PEG 1500 directement... on n'a pas besoin de déshydrater l'échantillon ? on le trempe dans du PEG fondu (faut avoir le matériel pour...), on laisse prendre et ensuite on coupe ? ça marche aussi avec des microtomes type Minot ?
Ensuite, on passe les coupes à la javel, colorants... pendant ce temps, le PEG se fait gentiment la malle ? il n'est pas nécessaire d'en faire plus ?

... j'aurais d'autres questions, plus tard.

Merci pour votre aide.

Salut Frédéric,

sujet longuement débattu ici ...http://www.lenaturaliste.net/forum/view ... 183&t=1119

1-la paraffine oublie,ça ne marche pas !(voir avis de Maraussan),les différente phases de fixation-déshydratation-inclusion modifient beaucoup les structures qui deviennent squelettiques.il faut aussi une étuve régulée pour la paraffine.

2-Le PEG 1500 semble efficace pour les lichens-voir les procédures décrites ici :
http://www.lenaturaliste.net/forum/view ... 183&t=1854 (je n'ai pas l'expérience j'ai essayé avec du 4000-ça marche pas)

3-Pour les coupes de tissu végétal frais,j'utilise un support de lame de rasoir et du Styropor que je débite en cylindres du diamètre du microtome à main indien.Y a pas plus aiguisé qu'une lame de rasoir et facile a changer quand elle est émoussée.fini la corvée d'aiguisage et d'affutage du rasoir ! Je fais une série d'une dizaine de coupe avec arrosage à l'eau de la section et recueil dans un verre de montre-sélection des meilleures coupes à la bino -puis décoloration à la Javel -lavage 15 mn- passage dans l'acide acétique dilué-coloration* au choix et montage**.(* Mirande ou Etzold vert de Klaus)(Glycérine -Gélatine glycérinée-ou déshydratation et baume du Canada ou Eukitt)

Tiens nous au courant de tes résultats et expériences.

Je tiens aussi à te féliciter pour ton dynamisme pour animer ce site , je suis toujours ébahi par la qualité de tes photos.

Cordialement

Hello

Un grand merci pour tous ces rappels.
La vue de la coupe est superbe.
Je note que tu as inséré la lame de rasoir dans un système de rigidification. Un produit acheté ? fait maison ?

Pour mes essais, on verra ça dans deux semaines (il me tarde d'y être)
Je vais mettre de côté la paraffine (mais il faudra peut-être que s'y mettre si c'est obligatoire pour un microtome type Minot - on ne sait jamais...)
Je vais essayer le PEG, en pensant que c'est un produit intéressant car englobant voire pénétrant. Il faut sans doute adapter le "nombre" selon la dureté supposée de l'échantillon. On imagine qu'un PEG 4000 ne va pas bien pour des champignons, trop mous alors qu'un PEG 1500 ne serait pas adapté à des coupes de végétaux ligneux - me trompe-je ?
Il semblerait que pour passer d'un PEG dur à un PEG mou, il faille ajouter de la glycérine (quantité ?)