Une observation énigmatique...

[BINO-BONI]

Le vert de méthyl donne effectivement un vert mais qui tire plutôt sur le bleu genre "turquoise". Bon ça se discute, vu que je suis daltonien

[Bernard-J]

Bonsoir,
Je ne suis pas un spécialiste des colorations mais dans un tel cas, je suggèrerais une approche expérimentaliste. Essayez les colorants que vous avez sous la main- à la cuisine - et expérimentez. Bien sûr, il y a les colorants spécifiques, par ex. pour les noyaux. Bizarrement, Je n'ai jamais utilisé l'hématoxyline parce que jamais actif au labo dans ces domaines cliniques. Par contre, le vert de méthyle acétique est utilisé pour les protozoaires.
Comme en ce moment,je me trouve face au problème de l'identification d'un cilié hypotriche présenté ici :
http://www.lenaturaliste.net/forum/view ... 55#p105155
Et je présume maintenant qu'il s'agit de Euplotes sp. et non de Stylonichia, vu sa taille. Voilà, le macronucleus devrait nous donner la solution car il a un aspect différent pour ces deux genres...

Ainsi, comme j'aime bien illustrer mes propos, j'ai fait un essai de coloration cet après-midi et voici le résultat:

Hypotriche , probablement Aspidisca sp. coloré au vert de méthyle acétique. Macronucleus en U

Aspidisca-vertmethyl-1.jpg (137.79 Kio) Vu 7026 fois

Idem. En division

Aspidisca-vertmethyl-2.jpg (147.83 Kio) Vu 7023 fois

Il faut être prudent. Pour le premier essai, j'ai mis une goutte de colorant sur la prep et je n'ai rien vu, trop concentré, les protos n'ont pas résisté. Pour ces photos, j'ai ajouté une micro-goutte sur la lame au bord de la lamelle. Le colorant diffuse gentiment à l'intérieur et ainsi on obtient un gradient de colorant bénéfique.


Pour revenir à mon problème Stylonichia vs Euplotes, pas évident. Il n'a pas pris le colorant et la remarque de Gérard que le vert est noyé par celui des algues bouffées est très pertinente. Je n'arrive pas à voir la structure du macronucleus avec toutes les photos FC, CP, CI,..

Euplotes-fondClair.jpg (129.92 Kio) Vu 7015 fois

Mais il est toujours possible de ruser. Voici une photo en fluorescence. La chlorophylle des algues fluoresce si intensément que le macronucleus en est éclairé --> macronucleus en U et non en O O --> Euplotes et non Stylonichia.

Euplotes-macronucleus.jpg (119.8 Kio) Vu 7015 fois

Pour en revenir au plasmode de Myxo, ce serait vraiment super d'essayer. Je n'ai vu aucune photo de noyaux de plasmode de myxo sur la toile.
Le vert de méthyle, le bleu de méthylène et quelques autres colorants sont bien utiles... et la photo fluo était aussi pour vous montrer que si on colore le protoplasme à la place du noyau, il est possible qu'on le devine en négatif. Le bleu de méthylène bien dilué pourrait éventuellement faire l'affaire.Il faudrait essayer.

[6le20]

Ouaouhhh, merci de toutes ces réponses méthodologiques !

Comme colorant, je dispose actuellement de :
bleu coton lactique,
bleu etzold
vert etzold
rouge congo

Je vais me procurer du bleu de méthylène et attendre que Bernard m'envoie du vert de méthyle comme il me l'a gentiment proposé par mail.

En attendant je stocke du plasmode au frigo en chambre humide, mais je ne suis pas inquiet, ayant découvert hier soir une station avec plusieurs centaines de ces organismes à différents stades de leur développement.
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Bon, j’ai crus en trouvant le premier que c’était un Myxo, puis en examinant la chose au microscope, j’ai changé d’avis en raison de l’absence de toutes structures identifiables, un peu comme un crachat coincé entre lame et lamelle.
Gérard le premier m’a dit de reconsidérer, à raison, mes conclusions préliminaires. Puis Bernard a confirmé en m’orientant vers Mucilago. J’ai donc observé la chose jusqu’à ce qu’elle sporule…
Depuis j’ai trouvé à Azille, une station avec des centaines de ces myxos.

Au début il se présente sur les brins d’herbe sous la forme d’une gélatine translucide :

Mucilago crustacea-1ajuv-Azille-12 2016-OLGjpg.jpg (78.4 Kio) Vu 6942 fois

Puis cette gélatine évolue en devenant blanche et en présentant en surface des formes arrondies plus ou moins gonflées :

Mucilago crustacea-1b-FerralsCorb-12 2016-LG.jpg (52.6 Kio) Vu 6941 fois

Puis elle évolue encore en séchant en surface pour présenter des sortes de crêtes qui correspondent aux verrues précédentes se desséchant :

Mucilago crustacea-1cJuv-Azille-12 2016-LG.jpg (84.31 Kio) Vu 6941 fois

Au stade ultime, la surface extérieure forme une croute blanchâtre qui laisse voir par transparence un contenu noirâtre composé de spores matures :

Mucilago crustacea-2aSporulant-Azille-12 2016-LG.jpg (80.92 Kio) Vu 6938 fois

Les spores sont mélangées avec des cristaux de calcium qui forment, au début, de petites étoiles :

Mucilago-5bCrist-Azille-12 2016-LG.jpg (49.53 Kio) Vu 6937 fois

Les spores, plus ou moins sphériques, sont échinulées sur toute leur surface. Elles mesurent ici entre 12 et 13 µm de diamètre hors épines, celles-ci mesurant un peu moins de 1 µm (07 à 0,9 µm) :

Mucilago-5aSp-Azille-12 2016-LG.jpg (91.55 Kio) Vu 6938 fois

Il s’agit donc de Mucilago crustacea Wiggers 1903
[Myxomycota / Myxomycetes / Physarales / Didymiaceae]


Il existe 3 variétés : (Mycodb)
Spores 11-14µm, spinuleuses ou verruqueuses : var. crustacea
Spores 9-11µm, verruqueuses (aethalium compact, capillitum pâle): var. solida
Spores 12-14µm, réticulées: var. dictyospora

Nous serions donc en présence de Mucilago crustacea crustacea

Je vais envoyer des échantillons, ainsi que deux autres espèces, à Marianne Meyer pour confirmer (ou infirmer) cette détermination.

[6le20]

Bonjour à tous

Bernard J m'ayant aimablement envoyé du bleu et du vert de méthyl, j'ai photographié le 27 décembre ce que je voyais à l'intérieur de deux plasmodes distincts. Malheureusement le temps s'étant mis au gel, je pense n'avoir trouvé que des formes de résistance (voir cet autre sujet) :

D'abord le Mucilago, sujet initial de ce post (bleu de méthylène acétique) :

Mucilago-6aResist-Azille-12 2016-LG.jpg (87.92 Kio) Vu 6820 fois

Puis dans le plasmode jaunâtre de ce qui pourrait être Fuligo septica (vert de méthyle acétique qui curieusement sort en bleu !) :

Myxo 12-6aResist-Cesseras-12 2016-LG.jpg (151.42 Kio) Vu 6821 fois

Je suppose que lors de journée ensoleillées suivant une nuit de gel, l'heure de prélèvement a son importance...

[Bernard-J]

Bernard J m'ayant aimablement envoyé du bleu et du vert de méthyl,... , sujet initial de ce post (bleu de méthylène acétique)

Bonsoir Sylvain,
Attention, le bleu de méthylène(BM) est un colorant différent du bleu de méthyle (bleu coton). Pour la coloration, le BM est dissout dans de l'eau contrairement au vert de méthyle qui est dissout dans de l'acide acétique. De même, le vert de méthyle ne doit pas être confondu avec le vert de méthylène qui est du bleu de méthylène nitré. Les mots se ressemblent, mais pas les formules, c'est la chimie !
La partie "chimie" du site de Marcel Lecomte donne tous les détails utiles:
http://www.champignons-passion.be/main.htm
Le bleu de méthylène est souvent utilisé comme indicateur redox car la molécule est incolore sous forme réduite et bleue sous sa forme oxydée. Le vert de méthyle, par contre, est un indicateur de pH, jaune à pH 1, vert à pH 2 et bleu à pH 3 et plus. Le vert de méthyle peut donner des colorations variables de turquoise à bleu selon sa pureté (et le pH de la prep). Il est en effet souvent contaminé par d'autres composés colorants, par ex. du violet cristal lors de sa fabrication.

J'aimerais bien voir tes photos moins agrandies - sur une plage de 100 um par ex au lieu de 10 um. Il me semble que l'on pourrait mieux se rendre compte de ce matériel.

[Maraussan]

Bonjour,
c'est d'actualité, les colorants.
DANS TOUTES LES SITUATIONS, il est indispensable de se référer au Chemical Abstracts Service Registry Number (CAS Number) d’identification de la substance chimique (dont les colorants évidemment), ce qui permet de lever toute ambiguïté.
Comme les pigments utilisés en peinture artistique, les colorants histologiques furent historiquement désignés par des noms commerciaux parfois farfelus, et fréquemment teintés d'un certain nationaliste, fluctuant selon les événements historiques du moment. Le Bleu de Nankin de France est un Chicago Blue au USA, et Edinburg Blue en Grande-Bretagne (exemples inventés de toute pièce). Les 3 dénominations se référant à un même composant...
Le CAS Number est lui bien unique.

Bleu de méthyl CAS N. 28983-56-4
Bleu de méthylène CAS N. 61-73-4
C'est plus clair, à défaut d'une certaine sécheresse.

[Bernard-J]

Excellent, merci Alain, c'était le point sur le i !
Et nous aurons bientôt l'arrivée du Trump blue(s).