Préparation du pollen

[André]

L'étude microscopique du pollen des plantes demande une petite préparation des grains de pollen.
En effet, à l'état naturel, les grains de pollen sont recouverts d'un enduit huileux et résineux, ce qui rend peu efficace leur observation directe.
La méthode employée le plus souvent en palynologie, est la méthode d'acétolyse.
Il existe d'autres techniques dont celle du dégraissage des grains à l'alcool. C'est cette dernière, décrite par Wodehouse et développée par Christian Colin (microscopiste décédé en 2004), qui sera exposée ici.

Le matériel consiste en:
-Lame, lamelle
-Alcool à 60° ou 70° ou 90°
-Gelatine glycérinée (GG) colorée dans la masse avec au choix: vert d'iode, vert de méthyl, fuchsine de Ziehl.
C'est cette dernière qui donne les meilleurs résultats d'après mon expérience.
J'utilise depuis quelques temps une préparation toute faite, qui a la consistance de la GG et la coloration type
" fuchsine " : la Glycerine Jelly de chez Brunel.
-Du pollen...Celui-ci peut être directement prélévé à la pincette sur les fleurs lorsque celles-ci sont grandes (ex:Tulipe), mais le plus souvent, il est plus facile de prélever des anthères.
Préférer des fleurs qui sont en pré-floraison ou qui viennent de s'ouvrir, il y aura plus de chance d'y trouver encore du pollen!
-Pincettes, bistouri...

Le matériel : (les fleurs utilisées pour la démonstration sont des Muscari) :

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Prélever les anthères et les déposer sur la lame dans une goutte d'alcool:

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Pour en extraire le pollen, il suffit de triturer les anthères avec la pincette. Rajouter souvent de l'alcool, et essuyer l'auréole qui se forme sur le pourtour de la préparation : cette auréole blanche est formée par la graisse et la résine enrobant les grains.
Il est souvent utile de procéder à cette opération sous contrôle de la loupe binoculaire afin de mesurer son efficacité et la présence du pollen.

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Dès qu'il y a assez de pollen extrait des anthères, éloigner celles-ci, ainsi que les autres débris végétaux.
A ce stade il est souvent très utile de laisser sécher le mélange pollen /alcool. Les grains de pollen se fixeront ainsi sur la lame, et les opérations de lavage à l'alcool disperseront moins les grains vers les bords de la lame.
Ces gouttes à gouttes de lavage par l'alcool devront se répéter 2, 3, 4 fois, en fonction de l'état du pollen.
Certains pollens ne sont guère enduits de cette résine (par exemple le Muscari), alors que d'autres espèces demandent jusqu'à 5 lavages.

Une vue d'une préparation montrant les grains de pollen baignant dans la graisse dissoute dans l'alcool. Cette préparation nécessite encore quelques lavages ...

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[André]

Dès que le pollen prend une couleur translucide, que l'auréole blanche est évacuée et que les résidus d'alcool sont évaporés, la préparation est prête pour recevoir le colorant associé au milieu de montage.
Le dosage de colorant est très important, mais empirique.... Une coloration trop forte noiera le pollen et aura du mal à bien faire ressortir les ornementations des grains ainsi que leurs apertures. De même, une coloration trop légère aura les mêmes inconvénients !
Dans la mesure où le colorant est intégré au milieu de montage, il n'est plus possible de faire régresser l'excès de colorant.

Prélever 3 ou quatre petits cubes de 1 à 3 mm de côté de gélatine colorée et les déposer sur la lame... Poser une lamelle en équilibre par-dessus:

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Offrir la lamelle aux rayons d'une lampe halogène ou utiliser les systèmes (de Chris ou de Jean) décrits ici : http://www.lenaturaliste.net/forum/view ... 183&t=1122

Dès que les petits blocs de gélatine ont fondu, et que la lamelle est solidaire de la lame, il faut exercer une pression sur la lamelle afin d'évacuer l'excès de gélatine, et faire baisser ainsi la distance entre le pollen et la face supérieure de la lamelle (cette distance doit tourner autour de 0.17mm.... )

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Attendre que la préparation soit refroidie pour éliminer l'excès de gélatine déposée sur le pourtour de la lamelle....Etiqueter...
La préparation est prête à passer sous le microscope:

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Les images, après avoir été optimalisées par Microcartouche, sont prêtes à alimenter la Collection de pollen du Forum Le Naturaliste

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[Fredlab]

Hello

J'ai acheté la "Glycerine Jelly" spéciale pollen de Brunel.
J'ai suivi la recette d'André - un ou deux rinçages/triturages à l'alcool.
J'ai mis le petit cube de gélatine, la lamelle puis le tout a été passé sous la lampe halogène de ma bino.
Ca marche, c'est simple.
Juste que j'ai des problèmes de bulles d'air dans la préparation.
J'ai aussi un peu du mal à estimer le taux de pression à exercer sur la lamelle pour finir le montage... sur les pollens (à montrer) de poirier, ça me semble trop écrasé)

Avez-vous le même genre de soucis ?
Une solution ?

Merci.

(après, puisque je n'ai pas de phénol ou d'autres substances toxiques, si je lute juste la lamelle au vernis, combien de temps de conservation je peux espérer ?)

[KATZEN]

Re Hello ,

Le protocole d’André marche à merveille, avec la " jelly made in Brunel " ;en effet il faut attendre souvent 12 à 24 heures pour obtenir une belle coloration,la fuchsine pénétrant lentement les grains.
Pour les bulles, j'appuie doucement avec un petit coton tige pendant que la gélatine est liquide,il y a cependant toujours qq bulles mais rarement gênantes pour l'observation ou la photo.
Comme compression, j'utilise tout bêtement un écrou de 8,et je laisse la préparation sur une surface froide,genre plaque métallique ou carreau de céramique de rebut. 1 heure après on peu examiner la lame-après j'enlève l'excès de gélatine avec une lame de rasoir et je passe un petit pinceau le long de la lamelle sous un filet d'eau,pour enlever les derniers résidus.Je relaisse sécher 24h a l'abri et je lute avec du protège vernis incolore " of my wife" .j'ignore la durée de la conservation ?

Savez vous si dans la jelly de Brunel il y a un conservateur ? objet de tant de palabres et de prises de têtes maraussianesques...

Bonnes préparations .

A+

[Fredlab]

Hello

Merci Gérard.
Effectivement, si ce genre de masse suffit, alors j'ai du appuyer trop fort



Vous ne trouvez pas qu'ils ont l'air un peu trop tectonisés ?
(les anthères étaient encore fermées, même assez jeunes)

[André]

Bonjour à tous, Fred
je leur trouve un aspect tout à fait normal.
Une trop forte pression fait se fendre les grain avec extrusion du contenu.
personnellement j'appuie un peu dessus avec une pincette : la gelatine évacuée de dessous la lamelle ne reviendra plus.
En ce qui concerne la GG de Brunel, j'ose espérer qu'elle contient tous les ingrédients utiles pour une longue conservation!
Ma gélatine faite maison à laquelle j'avais simplement ajouté quelques gouttes de désinfectant incolore tient depuis plus de 8 ans....si, si , Alain Maraussan je t'assure !

[Tessa]

bonjour les Amis

j'ai abandonner la microscopie une vingtaine d'années, et mes anciennes lames à la GG n'ont pas de problèmes de champignons, quelques unes sont mal luttées et présentent des bulles d'air. le seul soucis de la gg (qui à 20ans) elle fond plus difficilement sur la plaque chauffante
jc

[KATZEN]

bonjour à tous,

Pour André ,

" j'avais simplement ajouté quelques gouttes de désinfectant incolore "

Sans trahir un secret de fabrication , quel désinfectant as tu utilisé ? car j'en ajouterais bien par précaution dans mes GG maison !

Sais tu si l'usage de laque à cheveux peut- être utile pour fixer les pollens sur lame en attente de traitement à la maison ?

Je viens de faire l'essai,et je trouve que le procédé permet de garder les lames dans une petite boite en attendant le traitement.
c'est à dire qu'en déplacement il suffit de qq lames dans une boite et la petite bombe de laque dans la poche et un crayon et carnet pour identifier les prélèvements.Déposer un peu de pollen en secouant la fleur sur la lame, pulvériser un fin brouillard de laque à 40 cm de la lame-le séchage est instantané.Après étiquetage , ranger la lame dans la boite à cet usage.
De retour au bercail ,passer la lame à l'alcool, il se produit un voile laiteux dû a la laque, mais il disparait vite après plusieurs passages à l'alcool - puis suivre la procédure,GG et lamelle ,compression "écrou".

Merci de votre avis et critiques sur ce procédé ?

A+

[Fredlab]

Hello

Il reste un peu de gras dans ta préparation de lys... mais sinon, le piqué est fantastique... j'aimerai bien arriver à ça.
(sinon, pour l'histoire de la laque : oui, pourquoi pas... je n'ai aucune expérience dans le domaine)
(pour le "désinfectant", c'est vrai que moi aussi, je suis intéressé)

[KATZEN]

Bonsoir à tous,

voici mon cadeau de Pâques ....d'où la nécessité du "désinfectant dans la GG !- GG préparée il y à 15 jours environ,sans antiseptique, déjà infestée...ça fait réfléchir.

A+