Retour sur les objectifs x40 pour fluorescence

[Eddy]

Bonjour le forum,

Il y a quelque temps je vous présentais un objectif Leitz x40 à immersion destiné à la fluorescence, et donc doté d'une ouverture numérique singulièrement élevée (1.3). Je me permets de récidiver en vous en présentant un autre du même genre, mais également pourvu d'un diaphragme à iris qui le rend compatible avec l'observation en fond noir. Il s'agit d'un objectif Olympus DApo 40 UVPL 1.3 oil. Il me semble avoir lu dans la documentation que cet objectif est utilisé pour la fluorescence en lumière réfléchie et pour le contraste de phase en lumière transmise. La version corrigée pour la planéité du champ (DPlanApo dans la terminologie d'Olympus) a une ouverture numérique de 1.0 seulement. Pour commencer, voici une photo de la bête :

olympus DApo 40 UVPL NA 1.3.jpg (6.79 Kio) Vu 5482 fois

Ensuite, quelques essais sur des diatomées plus ou moins grandes issues d'une lame test de Dominique Prades, en fond noir. L'iris est fermé à mi-course seulement, ce qui donne un fond bleu nuit tout en gardant une bonne résolution.

diatomee-1.jpg (12.3 Kio) Vu 5478 fois

diatomee-2.jpg (28.33 Kio) Vu 5484 fois

Un crop de l'image précédente :

diatomee-2-crop.jpg (51.69 Kio) Vu 5502 fois

Et pour finir un crop d'une probable Surirella, dont les perles sont encore visibles en fond noir (mais peu contrastées) :

diatomee-8.jpg (93.67 Kio) Vu 5481 fois

Tous ces clichés sont pris à 100 ISO avec des pauses de l'ordre de 0,5 s. Si des personnes sont intéressées par la poursuite de ces tests, je peux prendre d'autres images, y compris en fond clair. De plus, j'ai à disposition les clichés originaux au format TIF, sans les artefacts de compression et, surtout, en pleine résolution.

Cordialement,
Eddy

[Eddy]

D'autres exemples que, malheureusement, je suis bien incapable de nommer. Ce sont toujours des crop à 100% d'une petite portion de l'image initiale :

diatomee-3-mi-course.jpg (174.69 Kio) Vu 5508 fois

diatomee-10-crop.jpg (59.75 Kio) Vu 5506 fois

diatomee-4.jpg (63.81 Kio) Vu 5480 fois

diatomee-7-crop.jpg (101.96 Kio) Vu 5495 fois

Cordialement,
Eddy

[DanielCrabbé]

Bonjour Eddy,

Ce sont de bien belles images et un bel objectif.

Qu'utilises-tu comme condenseur fond noir ? J'ai celui d'Olympus à immersion, mais je ne l'ai pas encore utilisé avec de l'huile, j'ai un peu peur d'en mettre partout. A sec je n'ai pas réussi à avoir un résultat valable. Enfin je n'ai pas trop insité ayant d'autres techniques à maîtriser pour le moment.

Je serait effectivement curieux de voir des images des images en fond clair.

C'est étonnant qu'il puisse être utilisé en contraste de phase. Est-ce avec le condenseur classique pour contraste de phase ?

Amicalement.

Daniel C.

[BelialL]

Salut Eddy,

Les résultats me paraissent vraiment très bons.

Je serais curieux de voir aussi quelques images en éclairage oblique.

[Fredlab]

Hello
Merci de nous faire baver...
le pouvoir séparateur est bien là

[Nhan]

Merci pour ces tests Eddy et très belles images,

je serais aussi curieux de voir ça en fond clair pour voir le contraste de la bête.

Amicalement

[Eddy]

Bonsoir Daniel, Kévin, Frédéric, Nhan, le forum,

Merci pour vos commentaires et votre intérêt . Je vais faire d'autres clichés en fond clair pour tester le contraste de l'objectif. L'éclairage oblique est aussi une bonne idée, je vais essayer de produire quelque chose de potable avec mais je n'ai pas vraiment d'expérience en la matière. En attendant, voici un cliché qui s'apparente grossièrement à du fond clair, obtenu avec le condenseur fond noir et l'iris complètement ouvert. Le résultat est bien sûr inférieur à celui qu'on obtiendrait avec un condenseur prévu pour le fond clair, mais ça peut d'ores et déjà donner une idée :

diatomee-9-crop-pleine-ouverture.jpg (121.1 Kio) Vu 5454 fois

Qu'utilises-tu comme condenseur fond noir ? J'ai celui d'Olympus à immersion, mais je ne l'ai pas encore utilisé avec de l'huile, j'ai un peu peur d'en mettre partout. A sec je n'ai pas réussi à avoir un résultat valable. Enfin je n'ai pas trop insité ayant d'autres techniques à maîtriser pour le moment.

J'utilise le condenseur DCW 1.4-1.2 comme celui que tu possèdes. L'immersion homogène pose effectivement problème quand on se promène trop sur la lame, on finit par en déposer sur les bords de la platine... Mais contrairement au fond clair, comme ce condenseur est quasi inutilisable sans huile, on n'a pas le choix... il faut donc éviter de trop se déplacer (disons pas plus de 2-3 cm, ce qui est déjà vaste !). En pratique la zone d'observation des lames tests de Dominique Prades est assez réduite pour ne pas rencontrer de tels soucis.

C'est étonnant qu'il puisse être utilisé en contraste de phase. Est-ce avec le condenseur classique pour contraste de phase ?

Ça en revanche c'est une colle pour moi... je crois que PL c'est pour Positive Low mais je n'en sais pas plus. Je ne pratique pas le contraste de phase et ne suis donc pas en mesure de te renseigner. Peut-être quelqu'un ici peut-il nous éclairer ?

Cordialement,
Eddy

[Daniel]

Bonsoir,
belles images en fond noir effectivement.
Le Pl sur cet objectif indique un objectif muni d'un anneau de phase, pour CP.
Il doit fonctionner ainsi avec les condenseurs CP Olympus.

[Eddy]

Bonsoir Daniel, le forum,

Merci pour ces précisions. Après quelques recherches, la brochure Olympus pour les objectifs LB précise :

DPlanApo UVPL and DAPo UVPL - Olympus offers four fluorescent phase contrast objective types. When a fluorescent specimen is being scanned, specimen quenching can be prevented by switching to phase contrast observation. When reflected light fluorescence and transmitted light phase contrast observation are performed simultaneously, a total specimen image (including the non-fluorescent details) can be obtained.

Cordialement,
Eddy

[Eddy]

Bonsoir le forum,

Suite aux demandes des précédents messages, voici quelques images en fond clair (donc à pleine ouverture) réalisées avec le même objectif que précédemment, combiné cette fois-ci à un condenseur aplanétique achromatique. Les clichés sont toujours des crop plus ou moins importants des images initiales. Vous noterez au passage que l'on voit aussi beaucoup plus les poussières du capteur.

D'abord une Surirella dont les perles sont correctement résolues :

diatomee-5-BF.jpg (133.06 Kio) Vu 5366 fois

Et d'autres de taille variable :

diatomee-2-BF.jpg (75.43 Kio) Vu 5360 fois

diatomee-3-BF.jpg (87.35 Kio) Vu 5365 fois

diatomee-4-BF.jpg (59.05 Kio) Vu 5362 fois

Et enfin celle-ci qui est vraiment très petite au x40 :

diatomee-6-BF.jpg (122.71 Kio) Vu 5364 fois

J'en profite pour évoquer le principal défaut de ce type d'objectif : passer en immersion dès le x40, alors qu'on peut justement espérer rester à sec jusqu'à x40, voire x50. Évidemment, l'ON ne dépassera pas 0.95 mais c'est peut-être plus pratique à l'usage.

Cordialement,
Eddy