Hello
Un petit up à ce topic.
J'ai profité d'un jour de vacances pour tester une ou deux choses...
Le constat... c'est pas gagné
mais je suis patient
Je suis parti sur une inclusion dans du PEG 4000 - je n'ai que ça pour l'instant.
Les produits comme le fixateur, le PEG 20000 (puisque c'est cité dans un protocole), de quoi faire des montages définitifs... ça n'est pas encore arrivé.
J'ai donc récupéré deux ou trois échantillons dans mon jardin - pas des plus faciles : une feuille de cotoneaster, un brin de saule pleureur avec un bourgeon axillaire.
J'ai fait fondre le PEG 4000 au bain-marie - il a fallu que je monte à 70°C pour que la fonte commence. Ensuite, une fois liquide et transparent, j'ai pu amener la température aux environs de 60°C - ça reste liquide.
J'ai fait tremper mes fragments de végétaux pendant deux heures - la feuille s'est retrouvée toute enroulée...
Ensuite, j'ai sorti les morceaux et je les ai posés sur du papier alu.
Ce matin, j'ai fait fondre à nouveau le PEG 4000 puis j'en ai coulé une certaine quantité dans un moule (voir les pièces qui étaient avec le microtome) et j'ai placé la feuille enroulée, momifiée dans son PEG, au centre, en essayant de la maintenir verticale pendant la prise.
Ensuite, j'ai démoulé, taillé le cube au cutter.
Pour coller le cube sur le portoir, j'ai chauffé le portoir à la flamme et j'ai posé le cube qui a fondu à sa base.
Ca tient très bien.
J'ai placé le couteau le plus abimé pour affiner la coupe.
Ce placement a été fait avec un angle un peu au pif...
C'est un point qui demande des améliorations je pense... non seulement il y a la lame, mais aussi il y a l'angle du portoir.
Par la suite, j'ai changé de couteau pour mettre le plus "neuf" (visuellement - voir les photos dans les pages précédentes) et j'ai essayé de comprendre le dispositif de réglage de l'avancée à chaque tour.
C'est bon, j'ai vu... les tiges les plus longues génèrent les déplacements les plus importants.
Quelle épaisseur... je ne sais.
Le PEG est très dur et il part en minuscules copeaux.
Dedans, il y a aussi des fragments de coupes de feuilles.
Nous sommes très loin des belles tranches, régulières, exploitables.
Les coupes ont été récupérées dans les copeaux, à l'aide d'un pinceau mouillé et elles ont été déposées dans de l'eau distillée.
Effectivement, le PEG résiduel se dissout instantanément dans l'eau, mais j'ai l'impression que le PEG qui aurait pu pénétrer des cellules, est plus difficile à extraire. Globalement, j'ai eu sur beaucoup d'échantillons l'impression d'un "voile" autour.
Pour l'instant, avec mes deux échantillons, mes résultats les plus acceptables ont été obtenus avec des tranches assez épaisses - tout est relatif... je ne pense pas faire mieux à la main - en modifiant un peu l'angle de la lame et en mettant la surface du porte-cube quasiment à la verticale.
Je ne sais pas si je fais bien.
Je n'aurais sans doute pas le temps de refaire des essais d'ici quelques temps... mais je me demande quand même si la fixation au Bouin (ou équivalent), ne facilite pas la coupe (échantillon moins "mou", moins "labile").
Je n'ai pas osé mouiller la lame du microtome -> risque de transformer en bouillie le PEG au niveau de la coupe (hydrophile)
Comment être sûr que tout le PEG est bien parti lors de la réhydratation ?
Sinon, dans les traitements ultérieurs des coupes - quand j'aurais des tranches régulières, exploitables - je pense quand même que je ferais des traitements pour les vider - là, sur du "frais", la lecture est confuse.
(rien n'empêche de faire aussi des séries non vidées)
On en reparlera dans un autre fil.
Pas de photos pour l'instant.
Mais ça viendra.
(en tout cas je peux te dire qu'ils coupent mes ciseaux !)
Chaque partie est rédigée par un spécialiste.
